上海博翎厌氧培养箱操作流程指导

厌氧培养箱的操作规程

　　（一）操作室厌氧环境形成：

　　1. 按使用要求放置好必要的附件和器具;

　　2. 通电源开照明灯，开温控仪，调节所需温度;

　　3. 操作室内放入1000g钯粒（封闭）和500g干燥剂，并放入美兰指示纸（封闭）;

　　4. 关紧取样室内外门，并抽真空校验;

　　5. 操作室内*次置换（氮气置换）：

　　A. 把乳胶手套套在观察板法兰圈上并扎紧

　　B. 接通氮气进气路，打开氮气控制阀1，使手套鼓起，关闭阀门1，然后扎紧袋口;

　　6. 操作室第二次置换（氮气置换）重复一次充氮过程，取样室先抽真空，并注意随时用脚踏开关开闭排气。如此连续三次氮气置换。

　　7. 操作室第四次置换（混合气体置换）：

　　（混合气体配比为N2 85%、H2 10%、CO2 5%）

　　A. 调换气路打开混合气阀3进气，充气时取样室先抽真空，并随时用脚踏开关开闭排气;

　　B. 关掉混合气体阀3，并打开阀5，使混合气体经过流量计，调整流量计，流量为每分钟10ml左右;

　　C. 混合气体重复2-3次转换，经过上述过程，基本形成厌氧环境。

　　8. 操作室内打开粑粒除氧剂，接通除氧催化器电源进行催化除氧，一小时后打开美兰指示纸观察其变色情况，不变色为操作室内达到厌氧环境;

　　9. 开紫外线灭菌灯，室内进行灭菌处理，灭菌时间按具体实验自定。

　　（二）菌种的置入和培养：

　　1. 检查取样室内门并关紧;

　　2. 打开取样室外门，将菌种放入取样室后即关上外门;

　　3. 取样室充氮置换三次过程：打开真空泵，先抽真空度500ml汞柱（66kPa）以上停，然后人工打开氮气阀2进气，使指针回复零位，关掉阀2。第二次重复操作一次。第三次操作时，使真空度500ml汞柱（66kPa）以上停，然后打开阀4进混合气，使指针回复零位，关掉阀4。取样室充氮置换三次过程结束;

　　4. 如选定真空度较低就需要增加置换的次数;

　　5. 取样室外门开启、关紧，再抽低真空度100ml汞柱（13kPa）检验;

　　6. 厌氧培养箱需要长期连续使用的条件：

　　A. 每天在操作室内打开美兰指示纸观察，如不正常就必须重新换气;

　　B. 要长期连续输入微量的混合气体，使补进的氮气能和微量的氧结合通过催化吸收，保证室内厌氧状态，补入混合气流量选定为每分钟10ml左右;

　　C. 连续培养运行一天，更换一次除氧剂和干燥剂。

　　D. 操作室内温度可任意选择和控制。

　　7. 混合气瓶、氮气瓶输出压力调整：调节减压阀，使输出压力0.1Mpa左右。