血清脂蛋白的离心分离方法

更新时间：2012-07-23 点击次数：3462

利用不同容量的角式转头及很容易配制的梯度液，在各种型号的超速离心机上都能得到满意的分离结果。下面举了几个分离实例，实际上还可以应用于各种型号各种容量的固定角式转头。

（一）梯度液

A液：11.40gNacl，0.1g EDTA-Na2，置于1000ml量筒中加入500ml重蒸水及1

ml 1N NaOH，混匀至全部溶解。加重蒸水至1000mlzui后再加3ml重蒸水（Nacl：0.195mol）。终密度1.006g/cm³，PH10.37。

B液：加24.98g NaBr 到100ml A液中。终密度1.182g/cm³。（Nacl：0.195mol， NaBr：7.65mol），PH9.72。

C液：加78.32g NaBr 到100ml A液中。终密度1.478g/cm³。（Nacl：0.195mol， NaBr：7.65mol），PH8.86。

（二）离心机及转头

• 离心机：Hitachi CP-MX系列超速离心机或其他类似机组。

Hitachi CS-150GXL微量超速离心机。

• 转头，离心管；S 140 AT：140,000rpm,1,050,000×g，10×2ml，K=5，1PC厚壁管。

S 80 AT3：80,000rpm,415,000×g，8×8ml，K=23，6PC厚壁管。

S 70 AT：70,000rpm,505,000×g，8×40ml，K=44，40PA管。

（三）血浆-血球分离：

全血，角转头或甩平转头3000rpm×20min，沉淀为血细胞，上清血浆待用。

（四）乳糜粒分离

离心参数：各种转头均可用，4×10⁶（g×min），10℃

梯度液：离心管下部3/4容积为血浆，上部1/4容积为0.15MNacl+0.3MEDTA。PH7.4。

离心结果：乳糜粒上浮，离心管倾斜，吸管贴管壁慢吸出（约占血浆容积的2~6%。禁令12小时以上供血者血浆中乳糜含量很低，食后供血者含量较高。

（五）血清脂蛋白分离

VLDL分离（ρ<1.006g/cm³）

LDL（含IDL）分离（1.006g/cm³<ρ<1.063g/cm³）

转头	离心管内液体分布	离心参数	结果
S140AT （CS-150GXL机组）	*次离心后上部VLDL取出，下部600μl移入另一离心管，加入300μl B液，充分混合	140，000rpm×80min 16℃ 加速：9 减速：7	上部1/3体积LDL+IDL吸出
S80AT₃ （CS-150GXL）	*次离心后上部VLDL吸出，，下部3.4ml移入另一离心管，加入1.7ml B液并充分混合	80，000rpm×5.5hrs 16℃ 加速：9减速：7	上部1/3体积LDL+IDL吸出
P70AT （CP-MX系列超速机或类似机型）	*次离心后上部11.7ml吸出，下部约24ml 移入另一离心管，加入11.7ml B液，充分混合	70，000rpm×10hrs 16℃ 加速：9 减速：6	上部1/3体积LDL+IDL吸出

HDL分离（1.063g/cm³<ρ<1.21g/cm³）

转头	离心管内液体分布	离心参数	结果
S140AT （CS-150GXL机组）	第二次离心后吸出上部300μl后，下部600μl移入另一离心管，加入300μl C液，充分混合	140，000rpm×140min 16℃ 加速：9 减速：7	可见较明显分层，上部为HDL，下部为血清白蛋白及球蛋白
S80AT₃ （CS-150GXL机组）	第二次离心后吸出上部约1.7ml、下部3.4ml移入另一离心管，加入1.7ml C液，充分混合	80，000rpm×8小时 16℃ 加速：9 减速：7	可见较明显分层，上部为HDL，下部为血清白蛋白及球蛋白
P70AT （CP-MX系列机或其他类型机组）	第二次离心后吸出上部1/3、下部2/3移入另一离心管，加入约12ml C液，充分混合	70，000rpm×15小时 16℃ 加速：9 减速：6	可见较明显分层，上部为HDL，下部为血清白蛋白及球蛋白